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基础医学研究所分子生物学实验室简介

发布日期:2016-11-29访问次数: 字号:[ ]


分子生物学实验室是进行分子水平前沿性的实验室。实验室配备了核酸蛋白测定设备、电泳设备、紫外检测、PCR、冰冻高速离心机等设备,可进行基础分子水平的分离、提取和检测。目前本实验室开设的实验技术主要有:蛋白、核酸的提取、实时定量PCR技术、RT-PCR技术、蛋白印记技术、Elisa技术、基因克隆技术等。

蛋白印记技术又称为Western杂交,或免疫印渍技术,即利用抗原-抗体反应,检测转移到硝酸纤维素膜上的特异性蛋白质。常用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等。

            

  

垂直电泳和转印装置对蛋白进行分离并将胶上的蛋白质转印到膜上。          

 

梯度PCR仪,可以进行PCR,RT-PCR,梯度PCR。  

                    

PCR实验是一种对特定基因进行的半定量实验。在微量离心管中,加入适量的缓冲液,微量的模板DNA,四种脱氧单核苷酸,耐热性多聚酶,一对合成DNA的引物,通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环,每一次循环使特异区段的基因拷贝数放大一倍,这样,经过若干次循环,使得基因放大了百万倍,扩增了特异区的DNA带。

     

实时定量PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,使每一个循环变得“可见”,最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA(orcDNA)的起始浓度进行定量的方法。实时荧光定量PCR是目前确定样品中DNA(或cDNA)拷贝数最敏感、最准确的方法。它对DNA或经过反转录的RNA通过PCR反应并实时检测DNA的放大过程,在扩增的指数增长期就测量扩增产物,因为扩增指数增长期测量值与特异DNA(RNA)起始量存在相关性,从而实现定量检测。RealTime PCR的基本目标是精确测量和鉴别非常微量的特异性核酸,从而可通过监测CT值而实现对原始目标基因的含量定量。其最大的优点是克服了终点PCR法进入平台期或过饱和期后定量的较大误差,实现DNA/RNA的精确定量。该技术不仅实现了对DNA/RNA模板的定量,而且具有灵敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点。

                       

紫外可见分光光度计,可以测量RNA、DNA、蛋白质的含量;酶动力学实验等。

        

Elisa实验是:借助酶标记抗体(或抗原)在体外与抗原(或抗体)结合,通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗原(或抗体)量的多少有关。

                     

基因克隆技术:应用酶学方法,在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合子,并使之在适当的宿主细胞中进行扩增,形成大量的子代DNA分子的过程。

实验室负责人简介:许倩,硕士,副高职,现主持分子生物学实验室工作。曾于2006年在解放军军事医学科学院进修分子生物学实验技术。多年的工作积累和不断的学习中获得丰富的经验、技术,熟练掌握PCR,蛋白印迹,ELISA、细胞培养等分子生物学方面的实验技术。

 

 

 

 

     

 

 





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